CHLOROFORM: ISOAMYL ALCOHOL (24:1)

Đặc tính sản phẩm
Chloroform: Isoamyl Alcohol 24:1 ức chế hoạt động của RNase, làm biến tính protein, hỗ trợ phân tách pha hữu cơ và pha nước, giảm sựu tạo bọt trong quá trình tách chiết.

Hướng dẫn sử dụng

Đối với mẫu mô thực hiện theo quy trình sau

• Bước 1: Nghiền 1g mẫu mô và thêm 4-5mL dịch ly giải (dịch chiết), hút trộn hoặc votex đều. Lưu ý: Dịch chiết nên được làm ấm ở 65°C, dịch chiết được thiết kế phù hợp đối với từng loại mẫu khác nhau, thường là CTAB có bổ sung PVP và các dung dịch đệm đối với thực vật.
• Bước 2: Thêm 1 lượng Chloroform: Isoamylalcohol 24:1 tương ứng với thể tích dịch chiết, trộn đều và ly tâm 10 phút ở 10000 rpm. Lưu ý: Thực hiện với thời gian lâu hơn nếu các pha chưa phân tách rõ. Bước 3: Hút dịch nổi và lặp lại bước 2 một lần nữa, Bước 4: Hút bỏ dịch nổi, và bổ sung 1⁄4 thể tích dịch rửa có nồng độ muối cao, trộn đều. Lưu ý: Nồng độ muối và loại muối trong dịch rửa được thiết kế phù hợp đối với từng loại mẫu.
• Bước 4: Ủ qua đêm và thực hiện ly tâm 20 phút với 10000rpm. Hút bỏ dịch giữ lấy lớp kết tủa
• Bước 5: Hòa tan RNA với 500uL 0,5% SDS. Thêm 1 lượng Chloroform: Isoamylalcohol 24:1 tương ứng. Hút dịch nổi
• Bước 6: Bổ sung Ethanol bằng 2 lần thể tích dịch nổi, cho kết tủa ở -70°C trong 30 phút, hoặc -20°C trong 2 giờ
• Bước 7: Ly tâm trong 20 phút, rửa lại với Ethanol 75%, làm khô và bảo quản trong dịch đệm TE 1X

Tham khảo thêm quy trình thực hiện tách chiết DNA từ các mẫu thực phẩm thô, thực phẩm đã qua chế biến, thức ăn chăn nuôi, các loại hạt tại hướng dẫn sử dụng bộ kit TopPURE® Food DNA Extraction Kit.

Đối với mẫu tế bào nuối cấy thực hiện theo quy trình sau

• Bước 1: 1mL dịch môi trường có chứa tế bào nuôi cấy được ly tâm với tốc độ 13000rpm trong 5 phút để thu sinh khối
• Bước 2: Thêm dung dịch đệm (10 mM Tris + 1 mM EDTA, pH 8) và SDS 50%, 10uL Proteinase K và ủ ở 65°C trong 20 phút. Đảo trộn sau mỗi 5 phút ủ
• Bước 3: 200uL CTAB 10%+ 0,7M NaCl, trộn đều, nhẹ, ủ ở 65°C trong 20 phút
• Bước 4: 300uL Chloroform: Isoamylalcohol 24:1, lắc trong 10 phút và ly tâm trong 10 phút với 12000rpm
• Bước 5: Hút dịch nổi sang tube mới, thêm 1mL isopropanol và giữ ở -20°C trong 30 phút
• Bước 6: Ly tâm ở 4°C, 13000 rpm trong 10 phút thu lớp cặn DNA
• Bước 7: Rửa 2 lần , mỗi lần sử dụng 1 mL Ethanol 70% và ly tâm ở 4°C, 12000rpm trong 20 phút
• Bước 8: Bổ sung 30uL nước cất vô trùng, hoặc TE 1X và bảo quản ở -20°C

Kiểm tra nồng độ tách chiết bằng cách đo OD hoặc điện di trên gel agarose. Tham khảo thêm cách thực hiện tại hướng dẫn sử
dụng bộ kit điện di TopSPEC® Agarose Electrophoresis Kit