Đặc tính sản phẩm
Phenol, saturated (pH7.9) tạo pha hữu cơ, có khả năng phân tách DNA khỏi protein. pH của Phenol có vai trò định vị vị trí phân lớp của DNA ở trong hỗn hợp tách chiết, khi pH 7.9 DNA và RNA sẽ hòa tan trong pha nước. Với tính chất bay hơi mạnh, độc tính cao, khuyến cáo nên hạn chế tiếp xúc trực tiếp đồng thời trang bị bảo hộ đầy đủ.
Ngoài ra, khi để lắng sẽ phân tách thành 2 pha, gồm pha nước bên trên và pha phenol bên dưới. Do tính chất dễ bị oxy hóa và thời gian oxi hóa nhanh hơn khi ở pH cao nên pha nước được giữ lại ở với lượng thích hợp để ngăn chặn phenol tiếp xúc với không khí. Khuyến cáo không loại bỏ phân lớp nước tránh ảnh hưởng đến hiệu quả tách
chiết và thời hạn bảo quản sản phẩm.
Hướng dẫn sử dụng
* Quy trình tách chiết tham khảo:
- Bước 1: Lượng mẫu đã đồng nhất và lượng Phenol:Chloroform:Isoamylalcohol 25:24:1 bằng nhau vào tube và vortex đều
- Bước 2: Ly tâm ở nhiệt độ phòng trong 5 phút với tốc độ từ 12000 – 14000rpm
- Bước 3: Hút giữ phần dịch nổi, chú ý không hút phân lớp phenol hoặc các chất tủa
- Bước 4: Thêm 1/10 3M Natri acetat pH 5.5 + 2 lần Ethanol 100% so với thể tích dịch nổi thu được
- Bước 5: Đảo trộn nhẹ nhàng. DNA có thể kết tủa ra khỏi dung dịch
- Bước 6: Tách DNA ra khỏi ống nếu thấy tủa hoặc ly tâm ở nhiệt độ phòng trong 15 phút với tốc độ từ 12000 – 14000rpm
- Bước 7: Rửa với Ethanol 70%. Lưu ý: Có thể rửa 2 lần và ly tâm nhanh để loại sạch Ethanol, chỉ thực hiện khi cần thiết
- Bước 8: Phơi khô trong thời gian ngắn nhưng không quá khô.
- Bước 9: Hòa tan DNA vào 30uL TE 1X
Lưu ý: Bổ sung Chloroform và Isoamylalcohol để có hiệu quả phân tách tốt hơn. Khuyến khích thiết kế quy trình, thành phần dịch chiết, dịch rửa phù hợp với đối tượng mẫu cần tách chiết hoặc tham khảo thêm quy trình tại hướng dẫn sử dụng Phenol:Chloroform:Isoamylalcohol 25:24:1
Đánh giá
Chưa có đánh giá nào.