CloneSmart® Type IIS Assembly Kit (PC-02) – Cloning Kit

CloneSmart® Type IIS Assembly Kit – Cloning Kit

GIỚI THIỆU

CloneSmart® Type IIS Assembly Kit là bộ công cụ tạo dòng dựa trên phương pháp Golden Gate Assembly, được tối ưu cho sự kết hợp giữa enzyme cắt giới hạn BsaI và DNA ligase.

Do vị trí nhận biết của BsaI nằm ngoài vị trí cắt của nó, nên có thể tạo ra các đầu dính (overhang) thiết kế tuỳ chỉnh (lên đến 256 loại overhang). Khi kết hợp với DNA ligase, BsaI cho phép các phản ứng cắt-nối đồng thời diễn ra trong cùng ống nghiệm (one-step).

Trong quá trình phản ứng, nhờ cơ chế cắt chọn lọc và nối liên tục trong chu trình nhiệt, các sản phẩm nối sai sẽ bị cắt bỏ, giúp tăng độ chính xác, giảm hiện tượng đa trùng hợp (multimerization) giữa các đoạn DNA. Do đó, với thời gian ủ khoảng 1 giờ, hỗn hợp phản ứng có thể sẵn sàng cho bước biến nạp.

Nguyên tắc hoạt động:

• Để lắp ráp các đoạn DNA tạo thành dãy DNA hoặc lắp ráp một hoặc nhiều đoạn DNA vào vector, các đoạn DNA Insert và plasmid phải mang vị trí nhận biết của BsaI và các đầu overhang phải tương thích với nhau.
• Đối với các plasmid dùng để tiền nhân bản (pre-cloning) hoặc tái nhân bản (subcloning) không có các vị trí BsaI, bộ dụng cụ này vẫn có thể được sử dụng kết hợp với các enzyme cắt giới hạn loại IIP (RE-IIP) phổ biến như EcoRI, BamHI, SalI và HindIII.
• Trong trường hợp này, DNA Insert được khuếch đại bằng các đoạn mồi được thiết kế đặc biệt sao cho các đầu 4 bp overhang do BsaI tạo ra tương thích với đầu 4 bp overhang do RE-IIP tạo ra, đồng thời một nucleotide được bổ sung trước trình tự 4 bp overhang trên mồi để ngăn chặn sự tái phân cắt tại các vị trí nhận biết RE-IIP.

CloneSmart® Type IIS Assembly Kit

ƯU ĐIỂM

• Hiệu quả và độ chính xác cao: Lắp ráp đơn hoặc đa phân đoạn DNA. Có thể thiết kế tùy chỉnh trình tự overhang với độ trung thực cao, không để lại sẹo tại vị trí nối.
• Tương thích phổ enzyme rộng và ứng dụng đa dạng: Hoạt động tốt với các enzyme cắt giới hạn nhóm Type IIP và thích hợp cho nhiều hệ thống vector phổ biến (pUC, pGEM, pET, pBAD).
• Quy trình đơn giản hoá, tiết kiệm chi phí: Thực hiện các bước cắt và nối trong cùng một phản ứng, rút ngắn thời gian thực hiện quy trình, giảm tiêu hao hóa chất.
• Giảm hiện tượng đa hoá: Loại bỏ hiện tượng đa trùng hợp giữa các đoạn DNA trong phản ứng nối, tăng hiệu quả hình thành sản phẩm đích và cải thiện hiệu suất tạo dòng.

THÔNG SỐ KỸ THUẬT

• Thành phần: TypeIIS Enzyme Mix –Bsal, 10X TypeIIS Buffer, pGS Vector, Control Insert, Nuclease-free water
• Điều kiện bảo quản: -20°C
• Hạn sử dụng: 12 tháng kể từ ngày sản xuất
• Quy cách: 10 tests/hộp
• Mã sản phẩm: PC-02

Tham khảo thêm:

Kit tạo dòng khác

HDSD CloneSmart® Type IIS Assembly Kit