TopSPEC® Air-Dryable ASFV qPCR Kit (Kit Real-time PCR sấy khô) SQV-201

1. Giới thiệu virus dịch tả heo Châu phi (ASFV)

Dịch tả lợn châu Phi (ASF) là một bệnh truyền nhiễm do virus ASF, hay African Swine Fever Virus, gây ra. Virus này thuộc họ Asfarviridae, không phải họ influenza như virus cúm lợn. ASF có nguồn gốc từ châu Phi và đã lan rộng sang châu Âu, châu Á, và các khu vực khác.

African Swine Fever Virus (ASFV) là một loại virus DNA sợi kép với bộ gene lớn, sao chép và nhân lên trong tế bào chất của các tế bào bị nhiễm. Bệnh dịch tả lợn châu Phi thường lây lan qua các vector truyền bệnh như bọ ve mềm, hoặc qua tiếp xúc đường hô hấp và tiêu hóa. Lợn cũng có thể nhiễm bệnh qua các vết cắn.

Sau khi nhiễm bệnh cấp tính và mãn tính, lợn có thể bị nhiễm lại và trở thành vật mang virus. Virus này chủ yếu tấn công các tế bào bạch cầu đơn nhân (monocytes) và đại thực bào (macrophages), xâm nhập thông qua cơ chế nội thực bào, nhân lên tại vùng rìa của tế bào chủ, và không gây tử vong cho tế bào chủ thông qua cơ chế nảy chồi.

Dịch tả heo châu Phi (ASF – African Swine Fever) là một bệnh dễ lây lan ở heo, với tỷ lệ tử vong có thể lên đến 100%. Tính đến năm 2022, ASFV đã xuất hiện ở hơn 50 quốc gia và ảnh hưởng đến gần 75% nguồn lợn chăn nuôi trên toàn thế giới.

2. Bộ Kit xét nghiệm virus dịch tả heo Châu phi sấy khô 

Mô tả: TopSPEC® Air-Dryable ASFV qPCR Kit là bộ kit real-time PCR sấy khô giúp xét nghiệm tác nhân ASFV (Vp72 gene) gây bệnh trên heo (lợn) bằng kỹ thuật Real-time PCR. Bộ kit được ABT thiết kế và sản xuất ở dạng master mix sấy khô được chia sẵn vào các tube PCR. 

Mẫu xét nghiệm: 

• Mẫu bệnh phẩm từ lách, hạch amydal, hạch bạch huyết, thận từ lợn: được nghiền thành huyễn dịch 10% với dung dịch nước sinh lý hoặc PBS vô trùng. Sau đó ly tâm 1500 rpm trong 10 phút. Thu dịch nổi có thể dùng để chẩn đoán phát hiện vi rút dịch tả lợn Châu phi bằng phản ứng qPCR.
• Mẫu máu toàn phần: máu được thu trong ống chuyên dụng chứa chất chống đông máu (không sử dụng ống chứa heparin vì sẽ gây ức chế phản ứng).
• Huyết thanh: Lấy 3 mL máu cho vào tube (không chứa chất chống đông EDTA và heparin). Sau đó, tiến hành phân tách huyết thanh bằng cách ly tâm ở 3000 rpm trong 15 phút. Huyết thanh sau đó được chuyển vào tube polypropylene vô trùng.

Điều kiện bảo quản:

• Nhiệt độ mát (2-8°C) trong 12 tháng 
• Nhiệt độ phòng khi vận chuyển trong vòng 1 tuần 

Thành phần bộ kit: 

Nguyên lý bộ kit sử dụng: 

• Phương pháp Real-time PCR được sử dụng để phát hiện vật liệu di truyền của virus trong nhiều loại mẫu khác nhau, cho phép phát hiện sự tồn tại của ASFV trước khi virus gây ra các triệu chứng rõ ràng ở vật nuôi.
• Mẫu: Các loại mẫu bao gồm lách, hạch amidan, hạch bạch huyết, huyết thanh và mẫu máu toàn phần từ lợn.
• Nguyên lý: Xét nghiệm ASFV sử dụng primer và probe để bắt cặp đặc hiệu vào trình tự DNA mã hóa cho protein đặc thù của ASFV. Hiện nay, các kit chẩn đoán thường thiết kế primers và probes dựa trên vùng trình tự mã hóa protein p72 của ASFV. P72 là protein đặc hiệu của ASFV, có khả năng nhận diện tốt kể cả khi mẫu chứa virus bất hoạt hoặc phân hủy. Bộ kit xét nghiệm ASFV của ABT cũng sử dụng trình tự nhận biết vp72 để phát hiện virus gây bệnh.
• Ưu điểm: Phương pháp này có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, cho phép phát hiện virus sớm. PCR và Real-time PCR được Tổ chức Sức khỏe Động vật Thế giới (OIE) khuyến cáo sử dụng như một phương pháp tiêu chuẩn để chẩn đoán ASFV (Tham khảo tài liệu OIE).

Kết quả Real-time PCR: 

3. Kit tách chiết DNA/RNA khuyến cáo

TopPURE® Genomic DNA Extraction Kit được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA virus từ mẫu huyễn dịch 10%;

TopPURE® Blood DNA Extraction Kit được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA virus từ mẫu máu toàn phần;

TopPURE® Serum Viral DNA/RNA Co-Extraction Kit được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA virus từ mẫu huyết thanh.